Resumo Este estudo visou avaliar o efeito de dois métodos de aplicação local de alendronato e de paratormônio (PTH) no reparo ósseo e avaliar as implicações sistêmicas. Um defeito de tamanho crítico (5 mm) foi criado na calota craniana de vinte e cinco ratos Wistar machos, e o osso removido foi particulado e enxertado de volta no defeito com diferentes tratamentos. Os animais foram divididos aleatoriamente em cinco grupos: A1: imersão do enxerto ósseo em solução de alendronato (3 mg/kg) durante 5 min; P1- imersão do osso em solução de PTH (20 μg); A2- aplicações locais semanais de alendronato 1 mg/kg; P2- aplicações locais semanais de PTH 20 μg; C: não foram utilizados medicamentos. Os animais foram eutanasiados 60 dias após a cirurgia. Foram removidos os blocos ósseos envolvendo a região do defeito para realização das análises histológica, histomorfométrica e imuno-histoquímica. MMP2 e MMP9 foram as imunomarcações utilizadas. Os rins, fígado e cérebro também foram removidos de todos os ratos para análise histológica. Os dados foram submetidos à análise estatística com um nível de significância de 0,05 (One-way ANOVA). A análise histológica revelou que o grupo C e o grupo P2 apresentaram maior quantidade de partículas ósseas viáveis do que as apresentadas pelos demais grupos. Os grupos A1, A2 e P1 apresentaram menos partículas ósseas viáveis em comparação com o grupo controle com predominância de tecido conjuntivo não mineralizado. A análise histomorfométrica não revelou diferenças entres os grupos na área óssea relativa ou em MMP2 e MMP9 (p>0,05). O grupo A2 mostrou presença de gordura no fígado consistente com esteatose hepática. Alterações no tecido cerebral foram observadas nos grupos A1 e P1.

Abstract This study aimed to evaluate the effect of two methods of local application of alendronate and parathyroid hormone (PTH) on bone repair and the systemic implications. A critically sized defect (5 mm) was created in the cranial region of twenty-five male Wistar rats, and the bone removed was particulated, and grafted back to the defect with different treatments. The animals were randomly divided into five groups: A1- bone graft immersion in alendronate solution (3 mg/kg) for 5 minutes; P1- bone graft immersion in PTH solution (20 µg); A2- weekly local applications of alendronate 1 mg/kg; P2- weekly local applications of PTH (20 µg); C- no drugs were used. The animals were euthanized 60 days after surgery. Cranial bone blocks were removed for histological, histomorphometric, and immunohistochemical analyses. MMP-2 and MMP-9 were used for immunolabeling. The kidneys, liver, and brain were also removed from all the rats for histological analysis. The data were submitted for statistical analysis with a level of significance of 0.05 (One-way ANOVA). The group C and group P2 presented a higher quantity of viable bone particles than the remaining groups. Groups A1, A2, and P1 presented with fewer viable bone particles than the control group, with a predominance of non-mineralized connective tissue. The histomorphometric analysis revealed no differences in relative bone area or MMP-2 or MMP-9 immunolabeling between the groups (p>0.05). Group A2 showed presence of fat in the liver consistent with hepatic steatosis. Changes in brain tissue were observed in groups A1 and P1.

Cistos ósseos uniloculares são as entidades mais comuns que afetam a região maxilofacial. O mecanismo de proliferação e expansão permanece obscuro. As metaloproteinases (MMPs) estão associadas a diversas condições patológicas. O objetivo do presente estudo foi correlacionar o aspecto radiográfico (área) e a presença de MMP-2 e MMP-9 em cistos dentígeros, cistos radiculares e tumores odontogênicos queratocísticos. A área radiográfica de cada lesão foi calculada usando a fórmula matemática da área de elipse. Todas as amostras foram submetidas à análise imunoistoquímica para estas enzimas. A área radiográfica média foi de 284,17 mm2, 235,81 mm2 e 381,81 mm2, respectivamente. As análises estatísticas não mostraram associação entre a imunorreatividade de MMPs e área radiográfica das lesões em todas as patologias estudadas, exceto para MMP-2 e cistos radiculares, nas quais as lesões menores tinham maior imunomarcação para esta enzima. Os resultados demonstraram que a quantidade de imunomarcação da MMP-2 e MMP-9 estão envolvidos com cistos dentígeros e radiculares na expansão óssea, ao passo que estas enzimas parecem estar relacionados com o comportamento biológico dos tumores odontogénicos queratocísticos, indicando invasão e proliferação celular. Além disso, há uma relação inversa entre a MMP-2 e MMP-9 em tumores odontogénicos queratocísticos (p=0,03; rs= -0,660), indicando atividade em diferentes regiões.

Unilocular bone cysts are the most common entities affecting the maxillofacial region. The mechanism of proliferation and expansion remains unclear. Metalloproteinases (MMPs) are associated to diverse pathological conditions. The aim of the present study was to correlate the radiographic aspect (area) and the presence of MMP-2 and MMP-9 in dentigerous cysts, radicular cysts and keratocystic odontogenic tumors. The radiographic area of each lesion was calculated using the mathematical formula of the ellipse area. All specimens were subjected to immunohistochemical analysis for these enzymes. The average radiographic area was 284.17 mm2, 235.81 mm2 and 381.81 mm2, respectively. Statistical analyses revealed no association between the immunoreactivity of MMPs and radiographic area of the lesions in all pathologies studied, except for MMP-2 and radicular cysts, for which smaller lesions had increased immunostaining for this enzyme. The results demonstrate that quantities of MMP-2 and MMP-9 are especially involved with dentigerous and radicular cysts in expansion, whereas these enzymes seem to be related to the biological behavior of keratocystic odontogenic tumors, indicating invasion and cell proliferation. Moreover, there is an inverse association between MMP-2 and MMP-9 in keratocystic odontogenic tumors (p=0.03; rs=-0.660), indicating activity in different regions.

Este estudo avaliou a imunoexpressão da osteocalcina no reparo ósseo de defeitos críticos tratados com tecido adiposo subcutâneo em rato e coelho. Foram utilizados 14 ratos e 14 coelhos. Um defeito crítico foi realizado na calvária de cada animal. Os animais foram divididos em 4 grupos experimentais: CR (controle rato), CC (controle coelho), TAR (tecido adiposo do rato), TAC (tecido adiposo do coelho). Nos grupos CR e CC, o defeito foi preenchido com coágulo. Nos grupos TAR e TAC, o defeito foi preenchido com tecido adiposo subcutâneo macerado. A eutanásia dos grupos CR e TAR ocorreu com 30 dias e dos grupos CC e TAC com 40 dias. Foram realizadas análise histológica e imunoistoquímica com a proteína osteocalcina. Os dados foram submetidos à análise estatística descritiva (moda). Nos modelos experimentais foi observada a imunoexpressão de osteocalcina. Contudo, o TAC apresentou maior imunoexpressão entre os adipócitos quando comparado ao TAR. Nos grupos CR e CC a ferida cirúrgica foi preenchida por fibras colágenas. No grupo TAR foi observado o preenchimento por fibras colágenas e presença de adipócitos no interior deste tecido. No grupo TAC o defeito foi preenchido parcialmente por fibras colágenas, com presença de adipócitos dispersos entre as fibras. Além disso, foi observado processo inflamatório crônico e sinais de neoformação óssea. Conclui-se que em ambos os modelos animais o enxerto de tecido adiposo apresentou baixa capacidade osteogênica. Contudo, o modelo animal coelho apresentou uma imunoexpressão da osteocalcina mais evidente e maior quantidade de matriz óssea neoformada.

The aim of this study was to evaluate the osteocalcin immunoexpression during the bone repair treated with subcutaneous adipose tissue in rats and rabbits. Fourteen rats and 14 rabbits were used in the study. A critical-sized calvarial defect was created in each animal. The animals were divided into 4 experimental groups: RC (rat control), RbC (rabbit control), RAT (rat adipose tissue), RbAT (rabbit adipose tissue). In the groups RC and RbC the defect was filled with a blood clot. In groups RAT and RbAT, the defect was filled with macerated subcutaneous adipose tissue. The euthanasia was performed at 30 days (RC and RAT) and 40 days (RbC and RbAT). Histological analysis and immunohistochemical analysis of osteocalcin protein expression were performed. Data were submitted to descriptive statistical analysis (mode). Osteocalcin immunoexpression was detected in the experimental models. Notwithstanding, RbAT showed higher positivity, especially in the adipocytes, than the group RAT group. In groups RC and RbC, the surgical wound was filled by collagen fibers. In Group RAT, the defect was composed by collagen fibers and adipocytes in the reparative sites. Similarly, in RbAT, the defect also was partially filled by collagen fibers and presence of adipocytes dispersed among the fibers. Additionally, chronic inflammatory process and areas of bone matrix deposition were observed. It may be concluded that in both animal models the adipose tissue demonstrated low osteogenic capacity. However, the rabbit animal model exhibited a more evident osteocalcin immunoexpression and a greater amount of newly formed bone matrix.